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實了個驗5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液

產(chǎn)品簡介

實了個驗5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液是一種專為非變性(native)和非還原性蛋白質(zhì)電泳設計的試劑

更新時間:2024-08-24
廠商性質(zhì):代理商
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應用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥,綜合

5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液(1 mL)是一種專為非變性(native)和非還原性蛋白質(zhì)電泳設計的試劑。該緩沖液在制備蛋白質(zhì)樣品時,保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象和二硫鍵的完整性,使其在電泳過程中以天然形式進行分離。這種緩沖液廣泛應用于研究蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)、酶活性、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用等領(lǐng)域,特別適合分析多亞基蛋白質(zhì)復合物和天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)功能。

1. 實了個驗5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液:產(chǎn)品概述

5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液是一種高濃縮的緩沖液,使用時需要將其稀釋至1×工作濃度。與SDS-PAGE不同,非變性電泳不使用去污劑(如SDS)或還原劑(如DTT、β-巰基乙醇),從而保留蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象、二硫鍵和生物活性。該緩沖液特別適用于研究蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象及其在生物功能中的表現(xiàn)。

2. 實了個驗5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液:主要成分與功能

2.1 甘油

甘油用于增加樣品的密度,確保樣品在加載時沉入電泳槽底部,而不會擴散或漂浮,保證樣品的精確加載。

2.2 溴酚藍

溴酚藍是一種指示劑,用于電泳過程中可視化樣品的遷移位置,幫助研究人員實時監(jiān)控電泳進展,并確定何時結(jié)束電泳。

2.3 Tris-HCl緩沖液

Tris-HCl緩沖液用于維持樣品的pH值,確保蛋白質(zhì)在電泳過程中保持其天然狀態(tài),避免因pH變化導致蛋白質(zhì)構(gòu)象或功能的改變。

2.4 不含變性劑和還原劑

最重要的是,這種緩沖液不含SDS(或其他去污劑)和DTT(或其他還原劑),確保蛋白質(zhì)保持天然的折疊狀態(tài)和完整的二硫鍵。這對于研究蛋白質(zhì)的天然功能和相互作用至關(guān)重要。

3. 應用領(lǐng)域

3.1 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究

5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液廣泛應用于研究蛋白質(zhì)復合物及其天然狀態(tài)下的相互作用。通過非變性電泳,研究人員可以分析蛋白質(zhì)如何在天然條件下形成復合物,從而深入理解這些相互作用在細胞中的生物學意義。

3.2 酶活性分析

對于需要保持活性的酶,非變性非還原性緩沖液非常適合。通過保持酶的天然構(gòu)象,研究人員可以在電泳后進行活性染色或其他分析,以研究酶在其天然狀態(tài)下的功能表現(xiàn)。

3.3 多亞基蛋白質(zhì)研究

該緩沖液特別適用于多亞基蛋白質(zhì)的研究,允許研究人員分析天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)二聚體、三聚體或更復雜的多聚體形式。通過非變性電泳,蛋白質(zhì)復合物可以在保留天然結(jié)構(gòu)的情況下被分離和分析。

3.4 電泳條件優(yōu)化

在優(yōu)化蛋白質(zhì)電泳條件時,5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液為研究人員提供了保留蛋白質(zhì)天然結(jié)構(gòu)和功能的選項。這對于開發(fā)新的電泳技術(shù)或優(yōu)化現(xiàn)有技術(shù)非常有用。

4. 使用方法

使用5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液的典型步驟如下:

  1. 樣品準備:將5×緩沖液與蛋白質(zhì)樣品按4:1的比例混合(例如,10 µL樣品中加入2.5 µL的5×緩沖液),混合均勻。

  2. 避免加熱:與變性電泳不同,在非變性非還原性電泳中,樣品通常不加熱,以防止蛋白質(zhì)變性和二硫鍵斷裂。

  3. 樣品加載:將混合好的樣品加載到已準備好的非變性PAGE凝膠的樣品槽中。確保樣品均勻沉入槽底,避免交叉污染。

  4. 電泳運行:按照非變性電泳程序運行電泳。通常使用較低的電壓,以減少熱量對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響。溴酚藍染料會隨著電流遷移,用于監(jiān)控電泳進展。

  5. 后續(xù)分析:電泳結(jié)束后,凝膠可以通過染色或其他分析方法進行蛋白質(zhì)的檢測和分析。

5. 產(chǎn)品優(yōu)勢

5.1 保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象和功能

該緩沖液不含變性劑和還原劑,能夠保留蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象和生物活性,使其在電泳中以近似天然的狀態(tài)進行分離。這對于研究蛋白質(zhì)的生物學功能和相互作用至關(guān)重要。

5.2 應用廣泛

緩沖液適用于多種非變性蛋白質(zhì)電泳應用,特別是在研究蛋白質(zhì)復合物、酶活性和蛋白質(zhì)相互作用時,提供了重要的實驗支持。

5.3 操作簡便

5×的濃縮形式使得該緩沖液使用方便,研究人員只需少量即可滿足實驗需求,減少了試劑的浪費,并且便于在不同實驗設置中靈活調(diào)整使用量。

6. 注意事項

  • 儲存條件:緩沖液應存放在4°C下,避免光照和高溫,以確保其穩(wěn)定性。

  • 避免加熱:非變性電泳中不要對樣品進行加熱處理,以防止蛋白質(zhì)變性和失去功能。

  • 防止污染:操作時應使用清潔的移液器和樣品管,避免不同樣品間的交叉污染。

7. 實驗應用實例

在研究信號轉(zhuǎn)導途徑中的蛋白質(zhì)復合物時,研究人員使用5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液進行非變性PAGE分析。通過保持蛋白質(zhì)復合物的完整性,他們能夠識別并研究這些復合物在信號傳遞中的角色,并進一步分析這些相互作用如何影響細胞功能。

在生物化學研究中,該緩沖液被用于分析酶的多聚體狀態(tài)。通過非變性電泳,研究人員可以觀察酶在天然狀態(tài)下的多聚體形式,并通過后續(xù)的活性分析,探討這些形式在催化反應中的作用。

8. 總結(jié)

5×非變性非還原性蛋白上樣緩沖液(1 mL)是一種關(guān)鍵的實驗試劑,適用于研究蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象、二硫鍵的完整性以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。通過提供一個不含變性劑和還原劑的化學環(huán)境,該緩沖液確保蛋白質(zhì)在電泳中的正確分離,同時保持其天然結(jié)構(gòu)和功能。其廣泛的應用范圍和操作簡便性,使其成為科研實驗室蛋白質(zhì)研究中的重要工具。


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